SÉRODIAGNOSTIQUE DE SÉROPOSITIVITEE
MÉTHODE ELISA (version de substitution 2015)
TP proposé par Thomas Petitfils (lycée Vauvenargues, Aix en Provence)
thomas.petitfils@ac-aix-marseille.fr
Pour les élèves 2x9 (binômes) :
- 1 tube noté NIF avec de l’eau distillée
- 1 tube noté D avec de l’eau distillée (enzyme de détection couplé)
- 1 tube noté S avec du jus de chou rouge (substrat)
- 1 tube noté SLG (sérum de Léonor Grey)
- 6 tubes notés C1 à C6 avec des dilutions au ½ de soude à 20% (C1=NaOH 20%)
- 1 flacon compte goute avec du PBS-Tween (eau distillée)
- 1 micropipette de 100 µL et 10 cônes pour P100
- 1 portoir en bois
- 1 barrette multi puis avec 100µL de gélose à 2%au fond
Sur la paillasse prof :
- Cônes pour P100
- Barrettes de réserves
Pour la préparation
- Le jus de choux rouge : Découper le chou rouge en lanières puis en petit rectangles, mettre dans une casserole, couvrir d’environ 1cm d’eau et porter a ébullition 30 min. filtrer avec un écumoire (conserver au firgo à l’abri de la lumière
- Les anticorps anti BSA (solution C1 à C6): réaliser des dilutions en cascade de raison ½ à partir de soude 20%.
- Le tube noté SLG : de la solution C2 faite précédemment.
- Les barrettes E.L.I.S.A. : préparer de la gélose d’agar agar à 2%, en couler 100µL dans chaque puis (prévoir 20 barrettes par classe)
Lecture assez rapidement !!
-Léonor Grey est un personnage utilisée par les collègues pour introduire le cycle d’immunologie des Ts
-Il est possible de jouer sur le pH de la gamme pour obtenir une coloration pour le positif, différente