Le coin du bidouilleur

Publié le 25 sept. 2017

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Le  lundi 25 septembre 2017

TP Elisa (substitution)

SÉRODIAGNOSTIQUE DE SÉROPOSITIVITEE, MÉTHODE ELISA

  • SÉRODIAGNOSTIQUE DE SÉROPOSITIVITEE

    MÉTHODE ELISA (version de substitution 2015)

     TP proposé par Thomas Petitfils (lycée Vauvenargues, Aix en Provence)

    thomas.petitfils@ac-aix-marseille.fr

     

    Pour les élèves 2x9 (binômes) :

     

    -            1 tube noté NIF avec de l’eau distillée

    -            1 tube noté D avec de l’eau distillée (enzyme de détection couplé)

    -            1 tube noté S avec du jus de chou rouge (substrat)

    -            1 tube noté SLG (sérum de Léonor Grey)

    -            6 tubes notés C1 à C6 avec des dilutions au ½ de soude à 20% (C1=NaOH 20%)

    -            1 flacon compte goute avec du PBS-Tween (eau distillée)

    -            1 micropipette de 100 µL et 10 cônes pour P100

    -            1 portoir en bois

    -            1 barrette multi puis avec 100µL de gélose à 2%au fond

     

    Sur la paillasse prof :

     

    -             Cônes pour P100

    -             Barrettes de réserves  

     

    Pour la préparation 

    -            Le jus de choux rouge : Découper le chou rouge en lanières puis en petit rectangles, mettre dans une casserole, couvrir d’environ 1cm d’eau et porter a ébullition 30 min. filtrer avec un écumoire (conserver au firgo à l’abri de la lumière  

    -            Les anticorps anti BSA (solution C1 à C6): réaliser des dilutions en cascade de raison ½ à partir de soude 20%.

    -             Le tube noté SLG : de la solution C2 faite précédemment.

    -            Les barrettes E.L.I.S.A. : préparer de la gélose d’agar agar à 2%, en couler 100µL dans chaque puis (prévoir 20 barrettes par classe)

     

    Lecture assez rapidement !!

     

    -Léonor Grey est un personnage utilisée par les collègues pour introduire le cycle d’immunologie des Ts

     

    -Il est possible de jouer sur le pH de la gamme pour obtenir une coloration pour le positif, différente