Matériel par binôme:

-    2 feuilles d’épinard frais

-    au moins 50 vers de Roscoff

-    1 solution d’alcool à 70°

-    1 solvant organique spécifique des pigments chlorophyllien (éther de pétrole 85%, acétone 10%, cyclohexane 5%)

-    1 tube de sable fin

-    2 supports de chromatographie (bande de papier Whatman)

-    2 éprouvettes munies d’un bouchon avec crochet de suspension

 -   1 tube à essais recouvert d’aluminium + portoir

-    1 tube à hémolyse recouvert d’aluminium + portoir

-     2 mortiers et pilons

-     1 paire de ciseaux fins

-     2 compte-gouttes

-     1 pipette 10 mL et propipette

-     1 micropipette et cônes

-     1 entonnoir

-     gaze fine et coton

-     1 règle

-     1 crayon

-     1 cache noir pour l’éprouvette

-     1 sèche-cheveux

  -    1 hotte aspirante

Protocole:

   1.          Extraction des pigments foliaires :

• À l’aide de ciseaux et au dessus d’un mortier, découper deux feuilles d’épinard frais en petits morceaux.
• Broyer manuellement en présence d’une petite quantité de sable fin et en ajoutant progressivement 10 mL d’alcool à 70°.
• Placer un entonnoir muni de gaze fine et de coton au dessus d’un tube à essai recouvert d’aluminium, puis filtrer le broyat. Le filtrat obtenu est une solution alcoolique qui contient les pigments foliaires.

2.          Extraction des pigments contenus dans les vers

• Déposer les 50 vers au fond du mortier, enlever le plus possible d’eau de mer
• ajouter 2 mL d’alcool à 70°, cela tue les vers
• Broyer manuellement en présence de quelques grains de sable fin, laisser décanter
• Récupérer le surnageant du broyat à l’aide d’une pipette et le stocker dans un tube à hémolyse recouvert d’aluminium. Le filtrat obtenu est une solution alcoolique qui contient les pigments contenus dans les vers.

3.          Dépôt des pigments foliaires:

• Verser précautionneusement 5 mL de solvant dans une éprouvette et fermer à l’aide d’un bouchon afin de saturer l’atmosphère en vapeur de solvant.
• Prendre le support de chromatographie par les bords, tracer un trait au crayon à 2 cm du bas pour marquer la ligne de dépôt, et écrire le nom de l’espèce filtrée en haut du support.
• Déposer 30 μL d’extrait pigmentaire au centre de la ligne de dépôt puis sécher à l’aide d’un sèche-cheveux.
• Répéter l’opération 5 à 6 fois afin d’obtenir un dépôt concentré.

   4.          Migration des pigments foliaires :

• Soulever le support de chromatographie par les bords, le suspendre au crochet dans l’éprouvette en vérifiant que le dépôt est bien au-dessus du niveau de solvant et fermer l’éprouvette.
• Amener délicatement l’éprouvette sous la hotte aspirante.
• Recouvrir d’un cache noir et laisser migrer le solvant à l’obscurité pendant 30 à 35 minutes.
• Retirer le support et sécher à l’aide du sèche-cheveux.

   5.          Migration des pigments contenus dans les vers :

              Protocole identique aux pigments foliaires

Sécurité :

Le solvant de chromatographie est à manipuler avec précaution, sous hotte filtrante chimique.

Précautions lors de la manipulation :