Activités pédagogiques testées

Publié le 14 avr. 2020

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Le  mardi 14 avril 2020

RÉSISTANCE AUX ANTIBIOTIQUES : méthode simulée avec des produits de substitution

Illustration du repiquage de la souche bactérienne ayant déjà été en contact avec l’antibiotique Ampicilline. dominique.trovatello@ac-aix-marseille.fr

  • résultats résistance aux antibiotiques de substitution

     

    RÉSISTANCE AUX ANTIBIOTIQUES : méthode simulée avec produits de substitution

     

    Un antibiogramme classique nécessite beaucoup de matériel couteux (souches de bactéries, milieu de culture, hotte à flux laminaire ou bec électrique pour ensemencer les souches de bactéries, autoclave pour stériliser les milieux de cultures, matériel de pipetage et d’étalement stériles…). De plus le résultat n’est visible qu’au bout de 48 heures.  C’est du coup un TP qui passe à la trappe. On peut donc utiliser des produits de substitution qui rendent ce TP beaucoup plus attractif.

     

    Mise en situation :

     

    Repiquage de la souche bactérienne ayant déjà été en contact avec l’antibiotique Ampicilline

    Nous avons deux bouillons :

    • un bouillon de culture initial noté Bi contenant des E.coli
    • un bouillon de culture final noté Bf contenant des E.coli prélevés à la périphérie du spectre d’action de l’ampicilline et remis en suspensions régulièrement pendant un mois dans un nouveau bouillon de culture.

    Nous allons mettre cette nouvelle souche en contact avec de l’ampicilline et comparer le spectre d’action obtenu avec celui de la souche originale.

    On peut prévoir de faire travailler la moitié de la classe sur l’expérience initiale et l’autre moitié sur l’expérience finale.

     

    À préparer :

     

    Tout se fait à l’air libre, puisque nous n’utilisons pas de vrais contaminants.

     

    Rouge de crésol : C'est un indicateur coloré de pH. Zone de virage: 7,4 (jaune) -> 9,0 (pourpre). Dissoudre 0,1 g dans 20 ml d'éthanol et compléter à 100 ml avec de l'eau distillée.        

     

    La gélose : pour 16 binômes, prévoir 200 ml d’agar à 1.5%. Lorsqu’elle est cuite (translucide), rajouter 5 ml de rouge de crésol. La gélose doit être jaune paille. Si ce n’est pas le cas, rajouter quelques gouttes d’HCl à 10 %  jusqu’à obtenir la bonne coloration (cela dépend du pH de l’eau distillée qui a servi à préparer la gélose). Couler la gélose dans les petites boites de pétri, laisser refroidir.

     

    Les bactéries : nous utilisons une solution de rouge de crésol rendue basique par ajout de quelques gouttes de NaOH à 10 %. Elle doit être bien violette. Cette solution simule nos "E.Coli", les mêmes pour les 2 expériences. Faire un lot d’eppendorf marqué Bi et un autre marqué Bf

     

    L’antibiotique : préparer 2 solutions d’HCl  à 10% et à 5 %. Les étiqueter respectivement 1 et 2. Ce seront respectivement  l’ampicilline de l’expérience 1, et l’ampicilline de l’expérience 2.

     

    Matériel par binôme :

     

    Pour les binômes travaillant sur l’expérience initiale :

    Pour les binômes travaillant sur l’expérience finale :

    • 1 petite boite de pétri + gélose
    • 1 eppendorf avec les « E.Coli » noté Bi
    • 1 eppendorf avec l’« ampicilline » noté 1
    • 1 pince fine
    • 1 petite boite de pétri contenant 1 disque de papier
    • 1 bécher 50 ml contenant 10 billes de verre ø6 mm maximum
    • 1 papier absorbant
    • 1 compte-goutte 1 ml

    Lunettes, gants, blouse

    • 1 petite boite de pétri + gélose
    • 1 eppendorf avec les « E.Coli » repiqués Bf
    • 1 eppendorf avec l’« ampicilline » noté 2
    • 1 pince fine
    • 1 petite boite de pétri contenant 1 disque de papier
    • 1 bécher 50 ml contenant 10 billes de verre ø6 mm maximum
    • 1 papier absorbant
    • 1 compte-goutte 1 ml

    Lunettes, gants, blouse

     

     

    Protocole :

     

    • Prélever à l’aide du compte-goutte 1 ml de solution de bactéries

     

     
    • La déposer sur la gélose
     
    • Verser les billes sur la gélose et les faire rouler pendant 50 s. dans la boite pour homogénéiser le dépôt de bactéries
     
    • Reverser dans le bécher les billes et le surplus de bactéries
    • À l’aide de la pince fine, tremper le disque de papier dans l’antibiotique 1, absorber le surplus avec le papier absorbant et le déposer sur la gélose.
     

    Résultats : au bout de 5 à 15 min

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

    Colonie d’e.coli d’origine:

     

    Colonie d’e.coli ayant été en contact avec l’ampicilline et repiquée durant 1 mois

     

     

    On fait mesurer le spectre d’absorption sur les 2 lots de boites : on remarque que dans la deuxième série de boite, le spectre a diminué. Cette obervation simule le comportement des deux échantillons.

     

    Dans l'expérience réelle, l'interprétation de cette diminution est que les E.Coli sont devenus résistants à l’Ampicilline.

     

    dominique.trovatello@ac-aix-marseille.fr